1. Kun määrität endotoksiinia verestä, kiinnitä huomiota menetelmien ja reagenssien valintaan.

2. Plasman tai seerumin valmistus

Yleisenä kliinisenä näytteenä plasma on päänäyte, ja sen käyttöaste on yli 95 %. Siksi on erittäin tärkeää valmistaa plasma kehon nesteen pääosana. Dasin mukaan endotoksiini on yleensä kiinnittynyt verihiutaleisiin vapaan tilan lisäksi, joten näytteenä on tarkoituksenmukaisempaa käyttää suuren määrän verihiutaleita sisältävää plasmaa. Ihmis- tai eläinplasmaa valmistettaessa käytetään tällä hetkellä soluvaurioiden estämiseksi enimmäkseen matalan lämpötilan erotusta, jossa käytetään plasmanäytteitä, jotka sisältävät suuren määrän verihiutaleita, eli 4 ℃ 1000gx10 minuutin erotusolosuhteissa tai 3000gx40 sekunnin erotusolosuhteet, kun matalan lämpötilan sentrifugia ei ole. Nopeaa ja pitkäaikaista erotusta ei saa suorittaa normaaleissa lämpötiloissa. Lisäksi plasmaa tai seerumia erotettaessa tulee välttää bakteerikontaminaatiota.

Seerumin valmistus: käytä ruiskua, jossa ei ole antikoagulanttia, kerää veri ja siirrä se sentrifugiputkeen ja aseta se jäävesihauteeseen 30 minuutiksi, 4 ℃, 1000xg, 10 minuuttia sentrifugointia varten.

Plasman tai seerumin erotuksen jälkeen, jos sitä ei käytetä väliaikaisesti, se voidaan pakastaa -80 ℃:een ja käyttää 1 kuukauden kuluessa. Huomautus Välttääksesi endotoksiinin adsorption, käytä säilytykseen lasista koeputkea.

3. Antikoagulanttien tyypit ja vaikutukset

Plasman valmistuksen aikana tiettyjen antikoagulanttien lisäyksen vuoksi antikoagulanttien tyypillä ja määrällä on suuri vaikutus palautumisnopeuteen. Yleisesti käytettyjä antikoagulantteja ovat pääasiassa hepariini, natriumsitraatti ja EDTA, joista hepariini on laajimmin käytetty. Tiedämme kuitenkin, että suuri määrä hepariinia häiritsee endotoksiinireaktiota, erityisesti laimennuslämmitysmenetelmässä ja kloroformiuuttomenetelmässä, mikä vähentää talteenottonopeutta, mutta vaikuttaa vähemmän PCA-menetelmään, joten lisätyn hepariinin määrä ja vapautuu plasman valmistuksen aikana, riittää vain 2-5 μl/ml.