R ekovery

1. Poista jäätynyt putki nestetypestä ja aseta se välittömästi 37 ℃ vesihauteeseen ravistaen kevyesti. Kun neste on sulanut (noin 1-1,5 minuuttia), ota pois vähän alkoholia ja laita se erittäin puhtaalle työpöydälle.

2. Ota solususpensio 15 ml:n sentrifugiputkeen, jossa on 10 ml elatusainetta (pese jäätynyt putki alustalla ja pese kaikki seinään kiinnittyneet solut) ja sentrifugoi 1000 °C:ssa 5 minuuttia.

3. Supernatantti käännettiin ja 1 ml väliainetta lisättiin solujen suspendoimiseksi. Savusta 10 cm:n maljaan 10 ml väliainetta ja ravista varovasti vasemmalle ja oikealle, jotta solut jakautuvat tasaisesti astiaan.

4. Merkitse solutyyppi ja päivämäärä, ihmisen nimi ja niin edelleen, laita se CO2-inkubaattoriin, kiinnitä solut ja vaihda väliaine.

5. Elatusaine vaihdettiin kerran 3 päivän välein.

P assage

1. Kasveja siirrettiin 80-90 %:n peittävyyden saavuttamiseksi.

2. Alkuperäinen media .

3. Lisää sopiva trypsiini (peitä vain solut) ja sulata 1-2 minuuttia .

4. Hajotus lopetettiin lisäämällä yhtä suuri tilavuus seerumia sisältävää väliainetta .

5. Puhalla solut pipettipistoolilla ja jätä ne kaikki riippumaan.

6. Solut aspiroitiin 15 ml:n sentrifugiputkeen ja sentrifugoitiin 1000 °C:ssa 5 minuuttia.

7. Kaada supernatantti ja lisää 1-2 ml alustaa kaikkien solujen puhaltamiseksi.

8. Solut siirrettiin useille viljelymaljoille solulajista riippuen. Yleensä syöpäsolut jaetaan viiteen soluun ja kolme normaalia solua välittyvät. Jatka viljelyä.

Vapaasti pilkkomaan soluja ja sentrifugoimaan niitä (ibid. edellä).

Suspendoi solut sopivalla pakastesäilytysliuoksella, jaa ne steriloituun pakasteputkeen, lepää muutama minuutti ja määritä solutyyppi ja pakasteen säilytyspäivämäärä. 4℃ 30 min, -20 ℃ 30 min, -80 ℃ yön yli ja säilytetään sitten nestemäisessä typessä.

Kylmäsäilytysliuoksen valmistus: 70 % elatusainetta 20 % FBS 10 % DMSO:ta. DMSO tulee lisätä hitaasti ja ravistaa tasaisesti.