Apumateriaalina ELISA-detektiokokeissa entsyymi lautanen sillä on ratkaiseva rooli ja se vaikuttaa suoraan lopullisiin koetuloksiin. Laatu Entsyymilevy riippuu pääasiassa sen herkkyydestä proteiinin adsorptiolle, erosta proteiinin adsorptiokyvyssä levyjen ja reikien välillä sekä erosta ostettujen erien välillä. entsyymilevy . Siksi valitsemalla an entsyymilevy tuote, jolla on korkea proteiinin adsorptioherkkyys, pieni ero proteiinin adsorptiokapasiteetin reikien välillä ja pieni ero erien välillä takaavat kokeen tekijälle luotettavien ja vakaiden koetulosten saavuttamisen.

Entsyymilevy luokitus: eri luokitusstandardien mukaan, lautasella on erilaisia ​​luokituksia.

1: Reikien lukumäärän mukaan se voidaan jakaa 96 reikään, 48 reikään jne. Koska entsyymilevy käytetään pääasiassa mikrolevylukijan kanssa lautanen markkinoilla on enintään 96 reikää, joten mikrolevyssä on 96 reikää.

2: Eri pohjien mukaan se jaetaan tasapohjaan, U-pohjaan, V-pohjaan jne.

Tasaisen pohjan taitekerroin on alhainen, mikä soveltuu mikrolevyn havaitsemiseen;

T he U-mikrolevyn taitekerroin on korkea, kätevä näytteenottoon, näytteenottoon ja sekoittamiseen, ja se voi tarkkailla värinmuutosta suoraan sijoittamatta sitä mikrolevylle, jotta voidaan määrittää, onko vastaava immuunireaktio.

V-pohjan mikrolevy voi imeä näytteen tarkasti.

3: Mikrolevyn ja proteiinin ja muiden molekyylien erilaisten sitoutumiskykyjen mukaan se jaetaan korkeaan sitoutumisvoimaan, keskimääräiseen sitoutumisvoimaan ja aminointiin.

(1) Korkea sitomisvoima

Tämän mikrolevyn pinnan jälkeen sen proteiinisitoutumiskyky paranee huomattavasti, jopa 300-400 ng IgG/cm2, ja pääsitoutuneen proteiinin molekyylipaino on > 10 kD. Tämän luokan mikrolevyjen käyttö voi parantaa herkkyyttä ja vähentää päällystetyn proteiinin pitoisuutta ja määrää suhteellisesti, mikä on helpompi tuottaa epäspesifisiä reaktioita. Antigeenillä tai vasta-aineella pinnoittamisen jälkeen ioniton pesuaine ei voi tehokkaasti sulkea sitoutumattoman proteiinin kohtaa, ja proteiinia tulee käyttää tiivisteaineena.

(2) Keskimääräinen sitomisvoima

Tällaiset mikrolevylevyt sitoutuvat passiivisesti proteiiniin pinnalla olevien hydrofobisten sidosten kautta ja soveltuvat kiinteän faasin kantajiksi makromolekyyliproteiineille, joiden molekyylipaino on > 20 kD ja joiden proteiinien sitoutumiskapasiteetti on 200-300 ng IgG/cm2. Koska se sitoutuu vain makromolekyyleihin, se sopii kiinteän faasin kantajiksi puhdistamattomina vasta-aineina tai antigeeneinä epäspesifisen ristireaktiivisuuden mahdollisuuden vähentämiseksi. Levy voi olla inerttiä proteiinia tai ionitonta pesuainetta tiivistysliuoksena.

(3) Aminointi

Tässä pintamodifikaatiossa mikrolevyssä on positiivisesti varautunut aminoryhmä, jonka hydrofobinen sidos on korvattu hydrofiilisellä sidoksella. Tämän luokan mikrolevyt sopivat kiinteän faasin kantajaksi pienimolekyylisille proteiineille. Käyttämällä sopivaa puskuria ja pH:ta pinta sitoutuu negatiivisesti varautuneisiin pieniin molekyyleihin ionisidosten kautta. Pintansa hydrofiilisten ominaisuuksien ja sen kyvyn sitoutua kovalenttisesti muihin silloittajiin, sillä voidaan kiinnittää dekontaminaatioaineisiin, kuten Triton-100, Tween 20 jne. liukenevia proteiinimolekyylejä. Tämän levyn vika on vähentyneen hydrofobisuuden vuoksi; lisäksi pinta on suljettava tehokkaasti. Hydrofiilisten ja kovalenttisten pintaominaisuuksien vuoksi käytetyn tiivistysliuoksen on kyettävä olemaan vuorovaikutuksessa minkä tahansa funktionaalisen ryhmän kanssa ei-reaktiivisessa aminoryhmässä ja valitussa silloitteessa.

4. Värin mukaan se voidaan jakaa läpinäkyvään, mustaan ​​ja valkoiseen.

Transparent on yleisimmin käytetty yleisimmissä entsyymi-immunisaatiokokeissa. Relcontrastissa läpinäkyvään mikrolevyyn verrattuna on myös läpinäkymättömiä mikrolevyjä valon havaitsemiseen, yleensä mustavalkoisia. Mustalla mikrolevyllä itsessään on valon absorptio, joten sen signaali on paljon pienempi kuin valkoisen mikrolevyn, joten sitä käytetään yleensä voimakkaan valon, kuten fluoresenssitunnistuksen, havaitsemiseen. Valkoista mikrolevyä käytetään heikon valon havaitsemiseen, jota käytetään usein yleiseen kemiluminesenssiin. Lisäksi musta mikrolevy voi myös heikentää epäspesifisten reaktioiden ongelmaa. Samalla on tärkeää huomata, että yleisellä mikrolevyllä ei voi olla valontunnistusta, koska kemiluminesenssireaktiosta säteilevä valo on isotrooppista, jos läpinäkyvällä mikrolevyllä valo ei leviä vain pystysuunnasta, mutta myös vaakasuunnassa, tee valo helposti reiän ja reiän seinämän välisen raon läpi, jolloin reiän valon absorptioarvo vaikuttaa viereisen reiän lähettämään valoon.

Hyvällä mikrolevyllä tulee olla hyvä adsorptiokyky, alhainen tyhjäarvo, reiän pohjan korkea läpinäkyvyys ja samanlainen suorituskyky levyjen välillä ja saman levyn reikien välillä. Raaka-aineiden eroista ja tuotantoprosessien eroista johtuen eri tuotteiden laatu on hyvin erilainen, joten jokaisen mikrolevyerän suorituskyky on tarkistettava etukäteen ennen käyttöä. Yleisesti käytetyt tarkastusmenetelmät ovat tietty pitoisuus ihmisen IgG:tä (yleensä 10 ng/ml), joka on päällystetty ELISA-levyn kuoppilla, pesun jälkeen, sopivan laimennoksen lisääminen entsyymileimattua anti-ihmis-IgG-vasta-ainetta jokaiseen kuoppaan, pesu lämpösäilytyksen jälkeen, lisäämällä substraatin väriä, pysäyttämään entsyymireaktio ja mittaamaan liuoksen absorbanssi kussakin kuopassa. Reaktio-olosuhteita säädettiin siten, että kunkin kuopan lukema pidettiin absorbanssissa noin 0,8. Kokonaislukemien keskiarvo laskettiin. Kaikkien yksittäisten lukemien keskiarvon ja kaikkien lukemien eron on oltava alle 10 %. Seuraavat kolme mikrolevyä ovat A, B ja C esimerkkinä.

Suora menetelmä: ihmisen IgG:n adsorption havaitsemiseksi mikrolevyn pinnalla

Kaksoisvasta-ainesandwich-menetelmä: antigeeni seerumissa positiivinen anti-ihmisvasta-aineelle

Kuten yllä olevasta kuvasta voidaan nähdä, näissä kolmessa bioentsyymilevytyypissä A-luokan mikrolevyllä on parempi proteiiniadsorptiovaikutus, mutta se parantaa myös proteiinin adsorption herkkyyttä, mikä voi tarjota luotettavampia kokeellisia tietoja. Lisäksi voit kysyä eräeron levystä. Seuraava on tietyn levyn eräero. Kuten eränsisäisen eron datataulukosta voidaan nähdä, mikrolevyllä on hyvä erän välinen stabiilisuus ja erän sisäisen variaatiokertoimen (CV) ero on noin 5,0 %, mikä on huomattavasti pienempi kuin erän sisäinen variaatiokerroin. alle 10,0 % kliinisen immuunireaktion laadunvalvontastandardissa. Siksi se soveltuu myös ELISA-kokeisiin.