Uutiset

Koti / Uutiset / Yksityiskohtaiset sentrifugointivaiheet sytoplasma- ja tumaproteiinien uuttamiseksi pöytäkoneen hitaalla pakastussentrifugilla

Yksityiskohtaiset sentrifugointivaiheet sytoplasma- ja tumaproteiinien uuttamiseksi pöytäkoneen hitaalla pakastussentrifugilla

lähettänyt Admin | 23 Mar
Pöytäkoneen hidasjäähdytyssentrifugia käytetään laboratoriossa biologisten makromolekyylien, sedimenttien jne. ensisijaiseen erotukseen ja uuttamiseen. Sen kääntöpää on pääasiassa valmistettu alumiiniseoksesta, joka on litteää ja kulmatyyppistä. Keskipakoputki on valmistettu kovasta lasista, polyeteenistä kovasta muovista ja ruostumattomasta teräsputkesta. Sentrifugi on varustettu käyttömoottorilla, ajastimella, säätimellä (nopeuden osoitin) ja jäähdytysjärjestelmällä (säädettävä lämpötila-alue on -20~ 40 ℃), joilla voidaan korvata pyörivät päät eri tehoilla ja eri pyörimisnopeuksilla. keskipakomateriaalin tarpeisiin.
Yksityiskohtaiset sentrifugointivaiheet sytoplasma- ja tumaproteiinien uuttamiseksi pöytäkoneen hitaalla pakastussentrifugilla:
1. Määritä solujen kasvutila. Solujen kasvutilan tulee olla 80 % tai parempi:
2. Sentrifugoi nopeudella 1500 r/min 5 minuuttia
3. Hävitä supernatantti, pese solut yhtä suurella määrällä kylmää PBS:ää ja toista 3 kertaa kuten vaiheessa 2
4. Arvioidun sademäärän mukaan lisää 5 kertaa isotonisen sispuskurin tilavuus solupartikkeleihin, jotta solut suspendoituvat hellästi ja vältät vaahtoa mahdollisimman paljon
5. Lisää lyysipuskuria suspendoituihin soluihin ja laita se jäille 15 minuutiksi, jotta solut laajenevat, mikä voidaan tarkistaa mikroskoopilla.
6. Lisää solukokeen laajennetuille soluille 10 % IGEPALCA-630, jotta lopullinen pitoisuus on 0,3 %, sekoita hyvin ja lisää varovasti.
7. Sentrifugoi välittömästi (käytä 1,5 ml EP-putkea nopeudella 5500 r/min 30 sekunnin ajan suurille määrille; käytä 50 ml:n putkea nopeudella 5500 r/min 2 minuuttia suurille määrille)
8. Siirrä supernatantti (sytoplasminen proteiini) uuteen pakastusputkeen
9. Suspendoi solut 5-kertaisella tilavuudella suspendoituja hiukkasia isotoniseen puskuriin ja sekoita hyvin
10. Sentrifugoi solususpensiota nopeudella 1500 r/min 5 minuuttia ja poista supernatantti
11. Suspendoi hiukkaset 2/3-kertaiseen uuttopuskurin tilavuuteen
12. Aseta putki tärisevälle sekoittimelle, ravista ja sekoita nopeudella 700 r/min 15 minuuttia ja sitten nopeudella 1400 r/min 15 minuuttia. Koko prosessin tulee olla varovainen vaahdon välttämiseksi
13. Sentrifugoi nopeudella 9400 r/min 15 minuuttia, siirrä supernatantti uuteen pakastettuun sentrifugiputkeen matalan lämpötilan sentrifugoinnin jälkeen
14.Jaa useisiin osiin ja pakasta ne nestetypellä ja säilytä (pitkäaikaisen varastoinnin tulee olla -80 ℃, lyhytaikaisen varastoinnin tulisi olla -20 ℃)
\

Contact Us

*We respect your confidentiality and all information are protected.